柄海鞘(Styela clava)糖组分的提取、纯化及生物活性研究

	柄海鞘(Styela clava)糖组分的提取、纯化及生物活性研究
其他题名	Extraction, Purification of Saccharides from Ascidian Styela clava and Its Biological Activities
	孙明律
学位类型	博士
导师	王长海
	2011-05-28
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位授予地点	北京
学位专业	环境科学
关键词	柄海鞘糖组分季节调查提取优化分离纯化生物活性
摘要	柄海鞘(Styela clava)为黄、渤海海鞘中的优势种群，是传统的污损生物，对近海养殖业造成极大危害。目前，针对其的高值化应用及药物开发的研究相对较少。有关其糖组分及活性的内容则鲜有报道。本论文以烟台海域的柄海鞘为材料，对各个季节柄海鞘样品不同部位糖组分的基本参数进行了测定和比对；优化了粗多糖的提取方案；对粗多糖和粗寡糖进行了分离纯化和基本结构分析；在此基础上对所得糖组分进行了体外抗氧化、体内抗肿瘤活性及体外免疫活性测定。本文首次采用水提醇沉法分别获得了来自于各个季节柄海鞘样品不同部位的糖组分。结果显示，柄海鞘各部位中以内脏团的糖提取率最高；通过氯化钡-明胶法和硫酸-咔唑法测得，各季节不同部位所提取的糖组分均含有硫酸根和糖醛酸。从整体趋势来看，柄海鞘粗多糖的糖醛酸含量略高于粗寡糖，而所有测定样品中，以提取自外被囊的粗多糖硫酸根含量最多。首次通过单因素实验和正交实验，获得了柄海鞘粗多糖浸提工艺的最佳方案，提取时间11 h，料液比1:12.5，pH 8.0，提取温度100 ℃。利用DEAE-52 纤维素离子交换色谱和Sephacryl S-400 凝胶过滤色谱对柄海鞘粗多糖进行分离纯化，获得纯化组分APS1-1 和APS2-1。两个组分得率分别是23.81%和36.19%，分子量分别为：1.32×106 Da 和9.51 ×105 Da，根据红外光谱数据推测，多糖分子中硫酸基连接在半乳糖的C-6 位。采用Sephadex G-15 和Sephadex G-100 凝胶过滤层析对柄海鞘寡聚糖进行了纯化，共得到三个组分，分别命名为AOS1-1、AOS2-1 和AOS2-2。其中，AOS1-1 分子量小于1500 Da，而AOS2-2 分子量在2 000 Da 左右。AOS1-1 和AOS2-1未检测出硫酸根的存在。所测定的多个柄海鞘糖组分表现出抗氧化活性，且均与浓度呈正相关。整体看来，糖组分粗品中，以提取自柄海鞘内脏团的寡糖活性最高，其对有机自由基的半数清除浓度EC50 达0.77 mg/mL，纯化样品中，寡糖纯化组分AOS1-1 和AOS2-2 没有表现出明显的抗氧化活性；多糖组分APS2-1 的抗氧化活性优于另一组分APS1-1。采用移植性肿瘤研究法对小鼠接种S180 实体肉瘤建立小鼠模型，研究了柄海鞘各糖组分的体内抗肿瘤效果。以粗多糖高剂量组的抑瘤率最大，为57.04%；所测定各样品组的脾指数和胸腺指数除个别组外均高于模型组；寡糖纯化组分AOS1-1 对荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖作用最强。通过小鼠体外免疫实验发现，柄海鞘多糖APS、寡糖AOS 及其纯化组分AOS1-1 和AOS2-2 均具有一定的免疫调节活性。AOS1-1 对小鼠脾细胞的增殖作用最强，当浓度为25μg/mL 时，增殖率达到50.66%；对小鼠腹腔巨噬细胞的增殖作用以粗寡糖AOS 效果最好，AOS1-1 略低，粗多糖APS 对其的增殖效果则随浓度的升高而增加，在所测定的最大浓度400 μg/mL 时达到最大值；所测定各组分均表现出促进小鼠腹腔巨噬细胞产生NO 的作用，组分之间差异较小
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.yic.ac.cn/handle/133337/3635
专题	中国科学院烟台海岸带研究所知识产出_学位论文
推荐引用方式 GB/T 7714	孙明律. 柄海鞘(Styela clava)糖组分的提取、纯化及生物活性研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院,2011.

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