柄海鞘(Styela clava) DHA 和EPA 高纯制备及化学成分的生物活性研究

	柄海鞘(Styela clava) DHA 和EPA 高纯制备及化学成分的生物活性研究
其他题名	High Purity Preparation of EPA and DHA, Chemical Constituents and Its Bioactivities from Styela clava
	陈斌
学位类型	博士
导师	王长海
	2011-05-28
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位授予地点	北京
学位专业	环境科学
关键词	柄海鞘营养成分分析油脂精炼化学成分生物活性
摘要	柄海鞘(Styela clava)为大型单体海鞘，在我国分布广，资源量大，但目前为止尚未能对其进行有效利用。本实验室之前的研究表明，柄海鞘油脂含量很高，特别是多不饱和脂肪酸EPA 和DHA 含量较高。本论文在此基础上采用有机溶剂法提取柄海鞘油脂，确定了提取的最佳工艺条件，并通过精炼处理和贮藏稳定性研究，提高了油脂的品质与安全性，采用尿素包合法和银离子络合法对精炼柄海鞘油脂中的EPA 和DHA 进行了富集纯化，确定了最佳工艺条件。同时首次获得烟台近海海域柄海鞘主要营养成分较为全面的季节变化规律和数据。本文通过萃取、色谱柱层析、制备薄层层析、重结晶等物理和化学方法对柄海鞘化学成分进行了较为系统的研究，从化学物质结构和生物活性两方面对柄海鞘进行了较为深入的研究。营养成分分析表明，柄海鞘营养丰富且含有多种人体必需的矿物质元素和微量元素。氨基酸组成分析表明，鲜味氨基酸含量达130.3-156 mg/g 干样品；必需氨基酸含量较高，各样品E/T 值均高于海参。采用气相色谱-质谱联用仪共检测出15 种脂肪酸，8 月份样品多不饱和脂肪酸含量最高，达59.30%。其中，以EPA 和DHA 的含量最为丰富，所占比例均高于常见海洋鱼类。采用有机溶剂法对柄海鞘油脂进行了提取，并通过正交实验确定了柄海鞘油脂提取的最佳工艺条件为：提取剂正己烷+乙酸乙酯，提取剂混合比1:1，提取温度50 ℃，料液比1:6，提取时间210 min，提取次数为2 次。柄海鞘油精炼的实验结果显示：采用磷酸脱胶，磷酸添加量为0.4%；脱酸使用的氢氧化钠浓度为27 °Bé，超碱量控制在0.3%；脱色时活性炭的用量为7%。通过氧化稳定性实验，对柄海鞘油脂的氧化稳定性进行了研究。结果表明，向精炼柄海鞘油中添加茶多酚可有效减缓油脂的氧化速度，并得出其最适添加浓度为0.02%。急性毒理实验显示，柄海鞘油对雌雄小鼠经口LD50 均大于10 g/kg.bw，属实际无毒级。采用尿素包合法对精炼柄海鞘油脂中的EPA 和DHA 进行了富集纯化，确定了最佳工艺条件：尿素与混合脂肪酸的比例为2:1(w/w)，最佳包合温度为4 ℃，包合时间为20 h，包合次数为1 次。气相色谱分析显示，经尿素包合后的产物EPA 和DHA 的纯度显著提高，总含量从29%提高至69.56%，得率为31.32%，其中EPA 含量从18.37％提高到40.46％，DHA 含量从10.84％提高到29.1％。采用银离子络合法对精炼柄海鞘油中的EPA 和DHA 进行了富集纯化，确定最佳工艺条件为：AgNO3 浓度4 mol/L、络合温度0 ℃、解离温度50 ℃、解离时间30 min。在此工艺条件下，EPA 和DHA 的纯度显著提高，总含量从29%提高至87.9%，得率为19.83%，该方法纯化效果优于尿素包合法。柄海鞘样品乙醇提取物经萃取先后得到石油醚组分、乙酸乙酯组分、正丁醇组分以及水溶性部分。对乙醇提取物和各个极性组分进行了体外免疫和抗氧化活性筛选，结果表明石油醚组分具有较好的体外免疫活性，其次为乙醇提取物；乙酸乙酯组分的抗氧化活性显著高于其余三个组分及乙醇提取物；乙酸乙酯组分的分离亚组分E5 的抗氧化能力和还原力均最高，其中对DPPH 自由基的半数清除浓度为122.06 μg/mL；β-胡萝卜素-亚油酸体系中，在浓度为200 μg/mL 时，抗氧化活性为68.92%。对乙酸乙酯部分进行了系统的化学成分研究，共分离得到9 个化合物，利用现代波谱技术鉴定出其中5 个化合物的结构，分别为：胆甾-7 烯-3β-醇（1）、胆甾-4 烯-3β, 6β-二醇（2）、胆甾醇（3）、鲨肝醇（5）和神经酰胺（6），其中化合物1、2、和5 为首次从柄海鞘中分离得到；同时对正丁醇部分进行了系统的化学成分研究，共分离得到6 个化合物，鉴定了其中5 个化合物的结构，分别为：苯丙氨酸（7）、尿嘧啶（8）、胸腺嘧啶（9）、2’-脱氧尿嘧啶核苷（10）和2’-脱氧胸腺嘧啶核苷（11），其中化合物7 为首次从柄海鞘中分离得到。
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.yic.ac.cn/handle/133337/3629
专题	中国科学院烟台海岸带研究所知识产出_学位论文
推荐引用方式 GB/T 7714	陈斌. 柄海鞘(Styela clava) DHA 和EPA 高纯制备及化学成分的生物活性研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院,2011.

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